はじめに

このセクションは、組織分散の結果を判断し、細胞の収量・生存活性・機能性を向上させるためのものです。 リベラーゼ酵素タイプと濃度の選択は、実験のアプリケーションと目的に大きく依存しています。 ある目的(たとえば、培養増殖のための細胞収量最大化)を指向する研究室で良い結果が得られた酵素タイプと濃度が、別の研究室または目的(たとえば単離した細胞を用いたイオン搬送の急性試験)においても最適であるとは限りません。 これからリベラーゼ リサーチグレード酵素による濃度を決定する場合は、 リベラーゼ リサーチグレードの濃度設定をご参照ください。

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結果を評価する際には、以下の点に注意が必要です:

• リベラーゼ リサーチグレードには、コラゲナーゼと中性プロテアーゼ活性しか含まれていません。
• コラゲナーゼ酵素は、細胞間マトリックスを消化します。
• 中性プロテアーゼは、コラゲナーゼと相乗的に作用します。
• 処理時間と濃度によって、中性プロテアーゼは細胞表面タンパク質を傷害します。
• 処理時間・酵素比・酵素濃度の全てが、細胞単離の結果に影響を及ぼします。
• リベラーゼ酵素は、血清・BSA・プロテアーゼインヒビターなどの変異因子のない状況で使用する必要があります。

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変異因子

分散バッファーから変異因子を除去することにより、スピーディに目的を達せられることがあります。 リベラーゼ酵素ブレンドは、製品表内の幅広い中性プロテアーゼ活性を保つようにデザインされています。 元来、酵素活性は、変異因子(血清・BSA・プロテアーゼインヒビター)を酵素バッファーに添加することにより維持されてきましたが、リベラーゼ酵素ブレンドを用いた場合、これらの因子を添加する必要はありません。 リベラーゼ酵素ブレンドスペック表では、一連の酵素が有する攻撃性についても言及されているので、表を確認して組織タイプと実験用途に応じて、攻撃性の強弱を選択することができます。

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酵素の不活性化

精製されたコラゲナーゼには酵素1モルあたり、亜鉛約1モルとカルシウム約2~7モルが含まれます(Bond and Van Wart, 1984)。 酵素を二価陽イオンのキレート剤にさらすと、亜鉛とカルシウムが除去され、酵素が不活性化されます(Seifter and Gallup, 1960)。 コラゲナーゼ消化の改善方法に関する詳細については、条件検討をご参照ください。

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Modification	Factor
Inhibitors	0.1 M EDTA (McShane, 1989) Cysteine (Seifter and Gallup, 1960) Mercaptoethanol (Seifter and Gallup, 1960) Protease inhibitors Serum Albumin
Stabilizers	Calcium (Bond and Van Wart, 1984)
Cofactors	Zinc, calcium (Calcium: Bond and Van Wart, 1984)

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