溶解から精製までの全ステップでタンパク質をcOmpleteに保護



Focus Application


> Protease Inhibition
> Protein Purification
> Cell Lysis


News


新発売: cOmplete His-Tag Purification Columns
His タグ標識タンパク質精製用レジンを充てんした、プレパックタイプのFPLC用カラムが登場。
> Read more


 

Application Note cOmplete His-Tag Purification Resin
IMACを用いた組み換えHisタグターミナルトランスフォーゼの精製。
> Read more

 


Products


cOmplete カクテル錠(プロテアーゼ インヒビター)
> cOmplete His-Tag 精製
> cOmplete ライシスKit
> PhosSTOPカクテル錠(ホスファターゼ インヒビター)

 




 
 



> cOmplete プロテアーゼ インヒビター
> cOmplete His-Tag精製
> cOmpleteライシスKit
> PhosSTOPホスフォターゼ インヒビター
 Related Products
> プロテアーゼ阻害剤
> タンパク質 プロセシング
> タンパク質解析



ロシュは、多様なタンパク質の標識・検出・精製・分析に関して幅広い経験を持つだけでなく、それらのタンパク質を分解酵素から保護することに関しても豊かな経験を有しています。 cOmplete シリーズは、細胞溶解から精製に至るプロセスにおいて、目的タンパク質の安定性と可溶性を向上させると同時に、タンパク質をプロテアーゼや酸化からの保全も容易にします。



Protease Inhibitors
 

> cOmplete ULTRAカクテル錠
市販のプロテアーゼ阻害剤カクテルでは最高の抑止力を持ち、理想的なコンディションにタンパク質を保ちます。cOmplete ULTRA錠は、酸性プロテアーゼおよび、より広範なセリン・プロテアーゼに対する阻害能力が向上しています。

Please visit the selection table


 

> cOmpleteカクテル錠
ロシュの開発したインヒビタータブレットの先駆け、cOmpleteカクテル錠は、多彩なパッケージ(EDTA含有の有無、梱包形態)が入手可能な、タンパク質分解を抑止するためのゴールド スタンダードです。



His-Tag Purification


> cOmplete His-Tag Purification Resin and cOmplete His-Tag Purification Columns
1ステップの作業で、Hisタグ タンパク質を高純度で精製できる、固定化金属アフィニティ クロマトグラフィ(IMAC)用マトリクスです。 ロシュ独自のニッケル・キレート技術によって、DTTなどの還元剤やEDTAのようなキレート剤にも対応しています。ボトル入りまたはプレパック カラムとしてお求めいただけます。



Cell Lysis 


> cOmplete ライシス Kits
凍結・融解の反復や超音波破砕、グラスビーズなどの従来法に比べ、細胞溶解をより簡単かつ迅速にします。 ライシス試薬とコンプリート錠を組み合わせているので、細胞溶解時にも複数のプロテアーゼを確実に阻害できます。



Phosphatase Inhibition


> PhosSTOPカクテル錠
PhosSTOPは、無毒性の阻害剤をロシュ独自のブレンドで配合した錠剤です。 水溶液(バッファ)中で速やかに溶解し、フォルマリン固定標本を含むバッファ中でも機能します。




Related Products



プロテアーゼ阻害剤

細胞には複数種のプロテアーゼが含まれています。すなわち、必ず複数のプロテアーゼ阻害剤を組み合わせ、細胞由来のタンパク質を完全に保護しなければ、さらなるプロテオーム解析(2次元電気泳動・質量分析・液体クロマトグラフィ等)はままなりません。ロシュは、細胞溶解液に1錠添加するだけで目的タンパク質を確実に保護できるcOmpleteに加えて、豊富なプロテアーゼ阻害剤をラインナップしています。



タンパク質プロセシング
ロシュの提供する組み換えトリプシンやエンドプロテイナーゼArg-C/Lys-C/Glu-C(プロテオミクス グレード)は、優れた切断力を持ち、高い再現性を必要とするアプリケーションに適しています。

タンパク質解析
タンパク質の特性を詳細に研究するための試薬(グリカン解析)をご用意しています。 ウェスタン ブロッティングやELISAで使用するための各種抗体およびエピトープ タグ、各種ラべリング用リガンド(ビオチン/ジゴキシゲニン/フルオレセインあるいはAP/PODなど)も豊富に取り揃えています。



  • グリカン解析

    炭水化物修飾の検出および特性評価のためのツール。


  • タンパク質の標識およびタンパク質の検出

    アルカリ ホスファターゼ(AP)/ビオチン/ジゴキシゲニン(DIG)/フルオレセイン/ペルオキシダーゼ(POD)などのタンパク質染色/検出用のリガンドを含む試薬とキット。


  • エピトープ タグ

    ヘマグルチニン(HA)/ヒトc-myc/ヒスチジン6残基(HIS6)などの汎用エピトープ検出のための抗体。


  • Western Blotting

    化学発光または発色法に基づくウェスタン ブロッティング試薬。


  • ELISA

    ELISA法によるタンパク質検出用 キットと試薬。


インヒビター セレクション ガイド

See also the Protein Purification Selection Guides
 >Tagによるタンパク質精製
 >抗体によるタンパク質精製

 

以下のリストを参考に、最適なプロテアーゼ インヒビターを選択してください。 すべての阻害剤の一覧はオンライン カタログを参照ください。
 

Protease Inhibitor
Cocktail Tablets

セリン
プロテアーゼ

システイン
プロテアーゼ

アスパラギン酸
プロテアーゼ

メタロ
プロテアーゼ

cOmplete ULTRA Tablets, EDTA-free +++ ++ +  
cOmplete ULTRA Tablets +++ ++ + +
cOmplete Tablets, EDTA-free ++ +    
cOmplete Tablets ++ +   +

Individual Protease Inhibitors

 

 

 

 

α2-Macroglobulin + + + +
Aprotinin +      
Bestatin       + (Amino peptidases)
Leupeptin + +    
Pefabloc® SC
Pefabloc® SC PLUS
+      
Pepstatin + +    
PMSF + +    


Protease-specific Inhibitor

阻害するプロテアーゼ

Antipain Dihydrochloride Papain, Trypsin (plasmin)
Calpain Inhibitor I Calpain I > Calpain II
Chymostatin Chymotrypsin
Trypsin Inhibitor (chicken egg white)
Trypsin Inhibitor (soybean)
Trypsin



Tagによるタンパク質精製



Tag ウェスタン
ブロッティング
IMAC 免疫沈降 イムノアフニティ
抽出
免疫蛍光
AviTag
 
Streptavidin-POD   Streptavidin Mutein Matrix Streptavidin Mutein Matrix. Lowered biotin dissociation constant (1.3x10-7M) allows elution of biotinylated proteins Avidin-Fluorescein or Avidin-Rhodamine
GFP
 
Anti-GFP   Anti-GFP Anti-GFP Direct green fluorescence of fused proteins or Anti-GFP with secondary antibody
HA
 
多数あり   Anti-HA,
Anti-HA Affinity Matrix, Anti-HA High Affinity
Anti-HA,
Anti-HA Affinity Matrix
Anti-HA-Biotin, Anti-HA Fluorescein
His6 or
His10

 
Anti-His6- POD,
Anti-His6-Peroxidase (2)
cOmplete His-Tag Purification Resin and Column Anti-His6
Anti-His6 (2)
cOmplete His-tag Purification Resin and Column Anti-His6 (2)
c-myc
 
Anti-c-myc,   Anti-c-myc POD   Anti-c-myc Anti-c-myc Anti-c-myc with secondary antibody
Protein C Anti-Protein C-POD   Anti-Protein C, Anti-Protein C Affinity Matrix Anti-Protein C, Anti-Protein C Affinity Matrix Anti-Protein C with secondary antibody



Protein A, G および Lによるタンパク質精製



Organism Antibody Protein A Protein G Protein L
Human IgG1 ++ ++ ++
  IgG2 ++ ++ ++
  IgG3 - ++ ++
  IgG4 ++ ++ ++
  IgM + - ++
  IgE + - ++
  IgD - - ++
  Fab + + ++
  F(ab)2 + + ++
  k light chain - - ++
  scFv + - ++
Mouse IgG1 + ++ ++
  IgG2a ++ ++ ++
  IgG2b ++ ++ ++
  IgG3 - + ++
  IgM + - ++
Rat IgG1 - + ++
  IgG2a - ++ ++
  IgG2b - + ++
  IgG2c + ++ ++
Rabbit IgG ++ ++ +
Horse IgG + ++ -
Pig IgG ++ ++ ++
Sheep IgG1 - ++ -
  IgG2 +/- ++ -
Goat IgG ++ ++ -
Chicken IgY - - ++
Cow IgG1 - ++ -
  IgG2 ++ ++ -

++= strong binding; += moderate binding; -=no binding


 




ウルトラなタンパク質保護

プロテアーゼ活性が十分に阻害されていないと、わずか数分間で長時間かけて精製したタンパク質に深刻なダメージを与えてしまいます。 より広範なプロテアーゼに対して阻害能力を高めたcOmplete ULTRAカクテル錠があれば、どんな細胞種でも確実にプロテアーゼ活性をブロックできます。
 

cOmplete Ultra Tablets.jpg
  • オールマイティな抑止力を持っています。
    cOmplete ULTRAカクテル錠は、哺乳類のセルライン(HEK-293 ・CHO ・COS等)はもちろん、酵母やE. Coli、昆虫細胞 にも対応しています。
  • 最高レベルの調合です。
    EDTAを含めて8種類と、市販のカクテル錠としては最多のインヒビターを配合しています。
  • インタクトなタンパク質収量を増加します。
    セリン ・システイン ・メタロおよびアスパラギン酸プロテアーゼを含む、多様なタンパク質分解酵素をブロックします。

 



cOmplete ULTRAは、ロシュ オリジナルの配合で可逆性・非可逆性を含む複数の阻害剤をブレンドした錠剤です。 水溶性に優れているため、バッファに添加したその時から効果を発揮します。 もう、プロテアーゼの取捨選択や、厄介で複雑な微量薬剤の秤量・濃度計算も必要ありません。

 

パフォーマンス


cOmplete ULTRA カクテル錠の安定した阻害能の検証

 

Inhibition ratio of proteases in CHO K1 lysate by cOmplete ULTRA Tablets with EDTA in relation to other tablets. Inhibition ratio of Proteinase K by cOmplete ULTRA Tablets containing EDTA in relation to other inhibitor cocktails.

Figure 1:CHO-K1ライセート中のプロテアーゼ活性阻害比率を、異なるカクテル錠で比較しました。

Figure 2:プロティナーゼKに対する活性阻害比率を、異なるカクテル錠で比較しました。




>完全長のタンパク質を高収率で試供品サンプルをリクエストしてcOmplete ULTRAの効果を体験してみませんか ?

>cOmplete ULTRAカクテル錠はPhosSTOPカクテル錠と組み合わせて、目的タンパク質をプロテアーゼからもホスファターゼからも保護することができます。


IMACをEDTA、DTTともコンパチブルに



cOmplete His-Tag Purification Resin

cOmplete His-Tag Purification Resin は、1ステップの作業でHisタグ タンパク質を簡単かつ高純度で精製できる、優れた結合力を持つ固定化金属アフィニティ クロマトグラフィ(IMAC)用マトリクスです。 ロシュ独自のニッケル・キレート技術によって、DTTなどの還元剤やEDTAのようなキレート剤、あるいは多様なバッファ組成物および塩濃度へ幅広く対応しています。バッファと阻害剤の自由度は、タンパク質の安定性と可溶性を向上させると同時に、タンパク質をプロテアーゼや酸化から保全することも容易にします。

cOmplete His-Tag Purification Column

cOmplete His-Tag Purification Columns はÄKTA システム (GE Healthcare)にそのまま使用できる、cOmplete His-Tag Purification Resinが充てんされたプレパック カラムです。
…read more

cOmplete His-tag 精製関連製品の最適化のヒントはQuick Protocolを参照してください。



cOmplete His-Tag Purification Resinを選ぶ理由: 「きれいに・たくさん」が長持ち。
 

  • きれいに精製できる理由: 薬剤耐性が優れています
    還元剤やキレート剤を使うか、あるいはバッファの組成は…すべての条件は、目的タンパク質の状態を最良に保つことを優先しましょう。
  • たくさん精製できる理由: イオンと目的タンパク質が強く結合します
    新規キレート技術によって、あらゆる環境下で強力な結合力と特異性を発揮します。
  • 精製力が長持ちする理由: セファロースとイオンも強く結合しています
    イオン漏出が少ないため、チャージなしで使用しても結合力が低下しません。また、イオンの低漏出は、タンパク質の酸化・凝集を予防します。
  • エコ&ラボ フレンドリー
    ラボ内作業の安全性向上、廃棄物処理コストの低減に貢献します。



cOmplete His-Tag Purification Resin

Figure 1: Tight binding of nickel visualized.
精製に使用前(左)と使用後(右)の外見比較。 cOmplete His-Tag Purification Column は5 回の再使用がRe-charge(イオンの荷電)無しで可能。 レジンの外観(色)がイオン漏出の少ないことを示している。

 

 

cOmplete His-Tag Purification Resin, Protein-binding performance with His6 CFP cOmplete His-Tag Purification Resin, loss of resin Ni ions under stringent conditions
Figure 2:

Protein-binding performance with His6 CFP.
cOmplete His-Tag Purification Resinを10mM DTT、EDTA 存在下でニッケルイオンRe-charge無しで使用した場合 (blue columns) と他社製Resin G を1mM EDTA と5mMDTT 存在下で説明書に指示されている方法にて使用した場合 (grey columns) の結果比較。
Result: cOmplete His-Tag Purification Resin はRe-chargeなしで、他社製品より高い結合力を維持できた。

Figure 3:

Loss of resin Ni ions under stringent conditions.
1ml のcOmplete Resin と2 種の他社製Resinを50mM NaH2PO4、300mM NaCl、10mM EDTA、10mM DTT、500mM Imidazoleを含む9ml のバッファー中でインキュベートした。 Result: cOmplete His-Tag Purification Resin の喪失ニッケルイオンは他社より圧倒的に低く、1% 未満であった。




> 開発に至った背景についてはTips from the developerをご覧ください。